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Chondrex&欣博盛生物:帶你了解蛋白純化

更新時(shí)間:2024-12-19   點(diǎn)擊次數(shù):613次

Chondrex公司提供一系列用于蛋白質(zhì)純化的填料樹(shù)脂。Chondrex總結(jié)了下面不同蛋白純化方法,以幫助您選擇合適的填料樹(shù)脂來(lái)純化目的蛋白。如需購(gòu)買(mǎi)Chondrex公司產(chǎn)品,咨詢產(chǎn)品技術(shù)問(wèn)題,請(qǐng)聯(lián)系Chondrex授權(quán)代理商欣博盛生物。

 

1.離子交換色譜法(1,2)

●. 每個(gè)蛋白質(zhì)都帶有凈電荷,故蛋白質(zhì)具有等電點(diǎn)(pI),等電點(diǎn)由蛋白質(zhì)的一級(jí)氨基酸序列決定。這種帶電性質(zhì)允許蛋白質(zhì)在離子交換色譜中選擇性地與帶相反電荷的填料樹(shù)脂結(jié)合。這項(xiàng)技術(shù)利用了帶正電荷的樹(shù)脂(陰離子交換:DEAEQ),或帶負(fù)電荷的樹(shù)脂(陽(yáng)離子交換:CM)。然后,pH或鹽梯度的改變會(huì)促使蛋白質(zhì)從填料樹(shù)脂中的被洗脫下來(lái)。

 

2.親和層析(3)

●. 親和層析是通過(guò)生物分子間強(qiáng)而可逆的相互結(jié)合的方式來(lái)純化特定蛋白質(zhì)的高效方法,這種方法在色譜填料樹(shù)脂上固定了一種可以與其他蛋白相互作用的蛋白質(zhì),允許通過(guò)改變條件,如pH或鹽濃度,選擇性結(jié)合某種目標(biāo)蛋白并隨后洗脫該目標(biāo)蛋白。

蛋白純化填料樹(shù)脂


離子交換純化

抗體親和純化

His-tag蛋白親和純化

Ligand or Chemistry

(Catalog #)

DEAE: 9079 (5 ml) Q:9081 (5 ml)

CM: 9080 (5 ml)

Protein A:9076 (1 ml)

Protein G:9077 (1 ml)

Ni-IMAC:9078 (5 ml)

Base Support

DEAE:Highly cross-linked 6% Sepharose

Q:Highly cross-linked 6% Sepharose

CM:Highly cross-linked 6% Sepharose

Protein A: Rigid, highly crosslinked Agarose

Protein G: Highly cross-linked 4% Sepharose

Highly cross-linked 6% Sepharose

Formats

A drip column / column chromatography

A drip column / column chromatography

A drip column / column chromatography

Binding Capacity (mg/ml)

DEAE: Weak anion exchange 110-160 μmol Cl- /ml media

 

Q: Strong anion exchange 180-250 μmol Cl- /ml media

 

CM: Weak cation exchange 90-130 μmol H+/ml media

Protein A: 60 mg (human IgG)/ml media

 

Protein G: ≥ 20 mg (human IgG/ml media

≥ 40 mg (His-tag protein)/ml media

 

16-23 μmol (Ni2+) /ml media

Equivalent Products

DEAE Sepharose 4FF

Q Sepharose 4FF CM Sepharose 4FF

MabSelect sure LX Protein G Sepharose 4FF

Ni Sepharose 4FF


Protein A/G對(duì)不同物種免疫球蛋白類(lèi)型的親和力

●. Protein AProtein G對(duì)各種免疫球蛋白(Ig)亞型、亞類(lèi)和物種表現(xiàn)出特異性親和力,這種親和力由Ig Fc區(qū)的特性決定。Chondrex在下表中列出了不同物種間Protein AProtein G與免疫球蛋白亞類(lèi)的相互作用強(qiáng)度。

物種

免疫球蛋白類(lèi)型

Protein A結(jié)合

Protein G結(jié)合

Human

IgG(normal)

++++

++++

IgG1

++++

++++

IgG2

++++

++++

IgG3

-

++++

IgG4

++++

++++

IgM

-

-

IgA

-

-

IgE

-

-

Mouse

IgG1

+

++++

IgG2a

++++

++++

IgG2b

+++

+++

IgG3

++

+++

Rat

IgG1

-

+

IgG2a

-

++++

IgG2b

-

++

IgG2c

+

++

Goat

IgG

+/-

++

Rabbit

IgG

++++

+++

Sheep

IgG

+/-

++

“-":No binding,"+":Weak binding,“++":Binding,"+++":Moderate Binding,"++++":Strong Binding

 

參考文獻(xiàn):

●. P.M.Cummins.K. D.Rochfort. B.F.O'Connor, lon-Exchange Chromatography: Basic Principles and Application.Methods Mol.Biol.1485,209-223(2017).

●. A.Jungbauer,R.Hahn,"Chapter 22 lon-Exchange Chromatography" in Methods in Enzymology, R.R.Burgess, Deutscher, Murray P., Eds.(Academic Press,2009)vol.463,pp.349-371.

●. M.Urh, D.Simpson, K.Zhao, Affinity chromatography: general methods. Methods Enzymol. 463,417-438(2009)


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